移動相にイオンペア試薬を使用する際に考慮する点は何ですか?


日付: 01/24/2019
カテゴリー:

0 投票
   印刷する    記事を評価する:

研究用にのみ使用できます。診断目的での使用はできません。


回答

イオンペア試薬はクロマト分離に困っている時に非常に役立ちますが、添加されたイオンペア試薬はLCパーツ、カラム、およびMSイオン源に付着する傾向があります。 これは、後続の分析におけるシグナル抑制、ならびに分析カラム性能の低下を招く可能性があります。

イオンペア試薬と質量分析装置を使用する際の成功のヒント:
1)イオンペアリング試薬の効果がある最小濃度を使用してください。
2)一般的に使用される試薬を選択してください。 TFA、TEA、HFIP、TBuAAまたはTBuAFなどの揮発性アルキル第四級アミン塩、およびn-ヘキシルアミンなどのアルキル第一級アミンが推奨されます。
3)分析対象物に合ったイオンペア試薬を選択します。(例えば、ペプチドまたはタンパク質のような正に荷電した種は、TBuAAのような正に荷電したイオンペア試薬に応答しないでしょう。同様に、負に荷電した種は、負に帯電したイオンペア試薬に応答しないでしょう。)
4)イオンペア試薬を使用した後、LCを徹底的に洗浄し、微量の残存試薬を除去します。 使用する溶媒および流速の選択は、使用するイオンペア試薬によって異なります。 (例えば、TFAでは50/50 ACN / Waterで十分ですが、おそらくTBuAAでは充分ではありません)。
5)分析が完了した後、イオンペア試薬を使用したカラムを取り外し、イオンペアアプリケーションでのみ使用するために保管してください。(イオンペア試薬の実際のメカニズムは不明であり、変化する可能性があります。分配モデル(分析物と複合体を形成するイオンペア剤)と吸着モデル(カラム固定相と複合体を形成するイオンペア剤)の2つの異なるモデルがあります。)どちらの場合でも、イオンペア試薬は固定相と複合体を形成することがしばしばあります。また、他の分析で再使用する場合は、カラムからゆっくりとイオンペア試薬が出ていきます。

代わる代わる分析手法を揮発性イオンペア試薬に切り替える場合、選択性は元の方法と同じではないことに注意してください。 過去にはIP-LCMS法がうまく使用されていましたが、他の方法が機能していない場合にのみ試してください。